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核心技術
全合成人源化納米抗體庫
時間:2018-03-22

納米抗體(Nanobody)或者VHH抗體(Variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody)是指僅由重鏈抗體可變區組成的基因工程抗體,應用廣泛的是駱駝VHH抗體。駱駝抗體天然缺失輕鏈,保留了重鏈的VH和CH2、CH3區域,容易構建VHH抗體。相對于人、鼠VH,駱駝VHH具有嚴格的單域結構特性,展現出穩定性高(常溫保存)、水溶性好和易于表達純化等優點。駱駝VH CDR3區域氨基酸長度更長,容易形成凸環結構深入抗原內部,使得駱駝VHH的抗原親和力并不遜于全長的人、鼠lgG抗體。駱駝和人VH有>80%的同源性,3D結構重合,駱駝VHH的免疫原性弱,人源化簡單;同時駱駝VHH FR2的疏水殘基被親水殘基取代,水溶性好,避免了由蛋白質聚集導致的免疫原性增強。另外VHH分子量小,適合用于多價/多功能抗體和ADCMedication的構建,也適合作為胞內抗體。但納米抗體存在半衰期短的劣勢,需要Fc融合、PEG化等技術延長半衰期。


駱駝免疫和納米抗體制備

駱駝經過4次的抗原免疫后,采集外周血,分離淋巴細胞,通過PCR、基因克隆、噬菌體展示構建免疫庫(“迷你”抗體庫,庫容108)。再經過3-5輪體外篩選,挑選親和力高的單克隆抗體并進行體外驗證。




全合成人源化納米抗體庫技術

考慮到駱駝免疫、免疫庫構建、抗體篩選和人源化改造的周期較長(6-12個月),動物免疫所需要的抗原量多(2mg左右),我們構建了全合成人源化VHH抗體庫。其具有如下優點:1)抗體開發周期短,1-2個月可獲得高親和力納米抗體;2)體外篩選,無需動物;3)抗原使用量少,常規開發只需要20ug抗原;4)通過外周血淋巴細胞PCR構建的天然庫(免疫庫和非免疫庫)有效庫容一般為106-108,而全合成庫的庫容量大,可達到1010,抗體篩選的成功率高;5)獲得的是人源化納米抗體,可以直接用于后續臨床開發。



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