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核心技術
噬菌體展示抗體庫技術
時間:2018-03-22

全人源/人源化抗體庫的構建策略:將全人源/人源化的單鏈抗體(Single-chainvariableragment,scFv)或者抗原結合域(Fragment antigen-binding,Fab)連接到噬菌體殼蛋白基因上;利用Kunkel技術在模板scFv或者Fab的互補決定區(Complementarity-determining region,CDR)引入大容量的基因突變;通過轉化,1:1地將突變scFv或者Fab表達在噬菌體膜表面,形成噬菌體展示抗體庫。


高親和力單抗的篩選策略:將目的抗原展示在體外、細胞表面或者動物體內;經歷3-5輪高通量的篩選周期(孵育、結合、洗脫和擴增),獲得親和力高的陽性單克隆噬菌體;進行DNA測序,獲得基因信息;利用哺乳動物細胞表達制備重組抗體。



第4代抗體庫的構建技術 通過完善上一代抗體庫,并引入新的設計理念,我們開發了新一代(第4代)的噬菌體展示抗體庫。其優點如下:1)全新設計突變引物,顯著提高抗體庫中各個抗體的親和力和特異性;2)不同氨基酸長度的CDRs均勻分布,增加不同表位特異性抗體的篩選機率;3)通過對基因突變方法的一系列優化,大幅增加有效抗體的庫容比例;4)噬菌粒(phagemid)設計和噬菌體培養方案的調整,進一步優化抗體片段(scFv或者Fab等)在噬菌體表面的表達數量和表達質量。




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